動物源性DNA檢測試劑盒是為專業(yè)的高通量實驗室設(shè)計的,但是現(xiàn)在這種試劑盒是適合中低等通量的實驗室使用,這個試劑盒專門為每天需要制備的樣品量達(dá)到100個的實驗室而設(shè)計。
該試劑盒在連接探針末段引入不同長度的標(biāo)簽序列,獲得長度各異的目的探針連接產(chǎn)物,利用熒光標(biāo)記的通用引物對連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴增,通過熒光毛細(xì)管電泳對擴增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離檢測,后通過對電泳圖譜的分析獲取各個位點的峰高,進(jìn)而對樣品目的區(qū)域的拷貝數(shù)進(jìn)行分析。
動物源性DNA檢測試劑盒的滲透壓很低(<20mosm/kgH2O),粘度也很小,可形成高達(dá)1.3g/ml密度,采用預(yù)先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。由于Percoll擴散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,不穿透生物膜,對細(xì)胞無毒害,因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒,還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。
整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格分在三區(qū)進(jìn)行:PCR反應(yīng)體系的配制區(qū);標(biāo)本處理、加樣區(qū);PCR擴增、熒光檢測及結(jié)果分析區(qū)。各區(qū)使用的儀器、設(shè)備、耗材和工作服應(yīng)獨立。實驗后即請清潔工作臺,并進(jìn)行消毒。
使用不含熒光物質(zhì)的一次性手套(經(jīng)常替換)、一次性離心管、自卸式移液器和帶濾嘴吸頭。
每次實驗應(yīng)設(shè)置陰陽性對照品,試劑準(zhǔn)備和標(biāo)本處理應(yīng)使用超凈工作臺(負(fù)壓式)或防污染罩,以防止對環(huán)境污染。
操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn),具有一定經(jīng)驗和操作技能。
操作臺、移液器、離心機、PCR擴增儀等儀器設(shè)備應(yīng)經(jīng)常用10%次氯酸或70%酒精、紫外線燈或臭氧消毒處理。
實驗中用過的吸頭、擴增完畢的離心管、標(biāo)本和其它廢棄物品一同滅菌后丟棄于地點。
試劑使用前應(yīng)在室溫下充分融化并混勻。